湖北钉螺凝集素分离纯化及相对分子质量的测定

摘要：

目的 分离、纯化湖北钉螺(Oncomelania hupensis)体内凝集素,测定其相对分子质量.方法 用饱和度为0～40％的硫酸铵对钉螺腹足部软体组织匀浆液进行分离,对其沉淀物先后采用Sephadex G-75凝胶过滤层析和Sepharose 4B亲和层析进行纯化.采用Brandford法测定纯化后凝集素的蛋白质含量,红细胞凝集试验测定其凝集活性,并计算比活力.用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测凝集素的纯化效果,并测定其亚基相对分子质量.利用Sephadex G-75凝胶层析测定钉螺凝集素的相对分子质量.结果 饱和度为0～40％硫酸铵对钉螺凝集素组织匀浆液进行分离,比活力从组织匀浆液的21.74 titer/mg提高到了61.93 titer/mg.经Sephadex G-75凝胶层析和Sepharose 4B亲和层析,钉螺凝集素的比活力分别提高到75.89 titer/mg和963.86 titer/mg.对凝胶过滤层析和亲和层析纯化后的凝集素进行SDS-PAGE分析,可见单一清晰条带,凝集素亚基的相对分子质量约为Mr 53000.凝胶层析测定钉螺凝集素的相对分子质量约为Mr 78 000.结论 盐析法、凝胶层析和亲和层析联合应用可对湖北钉螺凝集素进行有效的分离纯化.湖北钉螺凝集素为单亚基蛋白.

关键词：湖北钉螺、凝集素、分离、纯化、相对分子质量

所属期刊栏目：29

分类号：R383.241(医学寄生虫学)

资助基金：安徽省自然科学基金11040606M214;安徽省教育厅自然科学基金kj2009B152

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：453-457