荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体

摘要：

目的 运用荧光定量PCR法检测异尖线虫类病原体.方法 于鱼类内脏中检获6种异尖线虫类幼虫:抹香鲸异尖线虫、简单异尖线虫、内弯对盲囊线虫、带鱼针蛔线虫、灰海鳗对盲囊线虫和台湾海峡鱼类中一优势种对盲囊线虫.提取各虫体DNA,PCR扩增ITS-2序列,测序并进行数据库比对.依据测序结果设计特异引物,常规PCR检验引物特异性.将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性和重复性试验.结果 构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数均在0.998以上.重复性实验中,6种虫体对应的变异系数(cv)最小值为0.18%,最大值为2.8%,试验间平均cv最小值为0.55%,最大值为1.94%,无非特异性扩增,溶解曲线的特异性和重复性良好.灵敏度实验中,可检出的最低模板浓度为1x102拷贝/μl,比常规PCR灵敏度高100倍.结论 初步建立了SYBR Green I 荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体的方法.

关键词：异尖线虫病、异尖线虫、ITS-2序列、荧光定量PCR、SYBR Green Ⅰ

所属期刊栏目：28

分类号：R532.1(寄生虫病)

资助基金：福建省科技计划项目2008N2005

在线出版日期：2010-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：194-199