采用实时PCR技术比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果

摘要：

目的 比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA的效果.方法 将分离纯化的隐孢子虫卵囊分别加入美国Promega公司(简称Promega)和上海捷瑞公司(简称捷瑞)基凶组DNA纯化试剂盒的裂解液、2%Triton X-100和5%异硫氰酸胍,同时联合使用冻融法、蛋白酶K法和声裂法裂解卵囊,用试剂盒法或Chelex-100法提纯卵囊基因组DNA,用实时PCR测定隐孢子虫卵囊囊擘蛋白(COWP)基因拷贝数,以Promega试剂盒为参照比较不同纯化方法的提纯效果.结果 Promega试剂盒的裂解液裂解隐孢子虫卵囊的效果最好.纯化所得卵囊COWP基因拷贝数可达(6.45～9.86)×106;其他依次为捷瑞试剂盒的裂解液[(2.38～3.69)×106、5%异硫氰酸胍[(1.27～2129)×105]和2%Triton X-100[(2.06～866.70)×103].冻融法+蛋白酶K法+声裂法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果最佳,其次为冻融法+声裂法和蛋白酶K法+声裂法,冻融法+蛋白酶K法效果最差.结论 冻融法+蛋白酶K法+声裂法联合使用能使卵囊DNA的提纯效率达到最大,捷瑞基因组DNA纯化试剂盒和5%异硫氰酸胍裂解法提纯隐孢子虫卵囊DNA可获得与Promega试剂盒相近的效果.

关键词：隐孢子虫、卵囊、实时PCR、DNA、提纯

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分类号：R382.9(医学寄生虫学)

资助基金：卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题WSBKFKT200701;国家卫生行业科研专项基金200802012;国家传染病重大科技专项基金2008ZX1004-002;2009ZX10602

在线出版日期：2009-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：130-134