实时荧光定量PCR法检测日本血吸虫

摘要：

目的 运用实时荧光定量PCR法检测日本血吸虫. 方法 根据日本血吸虫18 S小亚基单位核糖体核酸(18S rRNA)基凶设计特异性引物,PCR扩增出1 450 bp序列,经TA克隆后转入大肠埃希菌DH5a,提取重组质粒,鉴定后作为模板制作荧光定量PCR标准曲线.方法 重现性评价.用初始循环数(Ct,拷贝/反应)进行标准差分析,并计算变异系数(CV).结果 制作的标准曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.998 7.方法 重现性评价,在1.05×107～1.05×103个拷贝范嗣内,对应的Ct平均值分别为17.55、20.93、24.32、27.59和30.95:CV值分别为1.31%、1.53%、0.90%、1.85%及0.90%.在重复性试验中试验间数据平均变异系数为1.27%,无非特异性扩增.在试验检测范围内(Ct≤30.95),可检测的日本血吸虫基因组浓度为6.15 pg,3h内完成.结论 运用荧光定量PCR方法 检测日本血吸虫DNA,快速、灵敏、特异性高.

关键词：日本血吸虫、荧光定量PCR、TaqMan探针、18S小亚基单位核糖体核酸

所属期刊栏目：26

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

在线出版日期：2008-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：299-303