日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库的构建

摘要：

目的 构建日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库.方法 用Trizol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,分离纯化mRNA,经随机引物反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上定向EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ接头,再用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ消化,使其成为两端分别带有EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ粘性末端的双链cDNA.收集300bp以上的双链cDNA片段,与T7Select 10-3b载体连接,经体外包装后,以大肠埃希菌BLT5403为宿主菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.通过滴度测定及PCR技术鉴定文库质量,用7种特异性引物以PCR法从文库中钓取目的基因以检测文库的代表性.结果 原始文库的库容量为4.98×106 pfu,扩增后文库滴度为3.85×1011 pfu/ml.对随机挑取的96个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为93.8%,其中95.6%的插入片段大于300 bp.7种特异性引物均能从文库中钓取到日本血吸虫成虫相关基因.结论 构建了日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库.

关键词：日本血吸虫、噬菌体展示cDNA文库、成虫

所属期刊栏目：25

分类号：R383.24;R392.11(医学寄生虫学)

资助基金：上海市科委资助项目054909002;科技部科技基础条件平台建设计划2005DKA21104

在线出版日期：2008-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：406-410