日本血吸虫弹性蛋白酶基因的克隆、表达及虫期特异性转录

摘要：

目的 克隆和表达日本血吸虫弹性蛋白酶基因(SjCE-2b),纯化表达重组蛋白,并研究该基因在各虫期的转录情况.方法 预测SjCE-2b基因的编码序列.绘制血吸虫尾蚴弹性蛋白酶家族成员系统进化树.用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析SjCE-2b基因在日本血吸虫各期转录的差异.将RT-PCR扩增得到的SjCE-2b基因亚克隆至载体pET28b,在大肠埃希菌中诱导表达得到重组蛋白rSjCE-2b,用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,Western blotting分析其免疫原性.结果 在虫卵、子胞蚴和成虫检测到SjCE-2b基因转录本(714 bp),表达的重组蛋白rSjCE-2b,相对分子质量约为Mr31 000,与预测的融合蛋白相对分子质量相符.构建了重组原核表达载体SjCE-2b/pET28b,并在大肠埃希菌中表达.纯化后的重组蛋白rSjCE-2b可被日本血吸虫感染的兔血清识别.结论 在日本血吸虫虫卵、子胞蚴和成虫发现SjCE-2b基因转录本.SjCE-2b基因有可能成为潜在的日本血吸虫病疫苗候选抗原和药物及诊断靶点.

关键词：日本血吸虫、弹性蛋白酶基因、原核表达

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分类号：R383.24;R392.11(医学寄生虫学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2003 CB716804;国家高技术研究发展计划863计划2004AA2Z1010;04DZ14010;国家自然科学基金30400562;上海市青年科技启明星计划04QMX1455;美国国立卫生研究院TMRC5P50 AI039461-10

在线出版日期：2008-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：359-363