粉尘螨3类变应原基因的克隆、表达、纯化与变应原性鉴定

摘要：

目的 克隆表达粉尘螨3类变应原(Derf3)基因,并鉴定纯化蛋白的变应原性.方法 取华南地区采集经实验室培养的粉尘螨(约500只)提取总RNA,经RT-PCR扩增Derf3基因.将目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质pET-Derf3.大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导培养,表达Derf3目的蛋白.重组rDerf3蛋白经6His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,蛋白质印迹法(Western blotting)分析该纯化Derf3蛋白与粉尘螨过敏患者血清IgE反应性,以鉴定重组Derf3的变应原性.结果 以粉尘螨总RNA为模板克隆出Derf3基因,该基因与GenBank(D63858)公布的Derf3比较有4个核苷酸差异,但同源性为99.5%.E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导后高效表达Derf3重组蛋白,主要以包涵体形式存在.经Western blotting分析该重组蛋白Derf3能与粉尘螨过敏患者血清的IgE反应,而不与健康者血清IgE反应.结论 构建了华南地区粉尘螨3类变应原的原核表达载体,并高效表达和纯化出具变应原性的Derf3重组蛋白.

关键词：粉尘螨、Derf3、变应原、原核表达、鉴定

所属期刊栏目：25

分类号：R75(皮肤病学与性病学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA214011;国家自然科学基金30271226

在线出版日期：2007-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：22-26