伯氏疟原虫顶端膜抗原1胞外区及其亚区的表达与免疫保护作用分析

摘要：

目的 表达伯氏疟原虫顶端膜抗原1(PbAMA-1)胞外区E及其各亚区,分析其免疫原性和免疫保护作用.方法 抽提伯氏疟原虫基因组,对PbAMA-1基因测序,依据该序列采用毕赤酵母密码子使用频率重新设计PbA-MA-1基因序列.将其胞外区E分为3个彼此重叠的基因片段D Ⅰ、DⅡ和DⅢ并进行优化,人工合成后在大肠埃希菌中诱导表达.表达产物经纯化和重折叠,分别与福氏佐剂乳化后免疫小鼠和家兔,均免疫3次,间隔2周.每次免疫剂量,小鼠为20μg,家兔为100μg.ELISA检测抗体效价,并以疟原虫攻击实验确定各抗原的免疫保护效果.结果 测得的PbAMA-1基因序列与Sanger测序中心公布的序列完全一致.密码子优化并人工合成的D Ⅰ、DⅡ、DⅢ和E目的基因片段在大肠埃希菌表达载体pET32a均获得诱导表达,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,各目的基因表达产物大小与预计的相对分子质量Mr 44 300、Mr33 300、Mr 29 900和Mr 67 200相一致.表达产物经镍离子螯合柱(Ni-NTA柱)纯化和谷胱甘肽(GSH)氧化还原法体外重折叠,蛋白纯度达90%以上,各纯化的重组蛋白在小鼠体内均激发产生高滴度抗体.其中,完整的胞外区E第3次免疫后抗体滴度为(34.4±0.15)×10-4,与其他组相比,免疫原性较其他各亚区更强(t=5.66,P＜0.01;t=2.27,P＜0.05和t=5.05,P＜0.01).取家兔免疫血清与感染伯氏疟原虫ANKA株的小鼠血膜抗原片进行间接荧光抗体试验(IFAT),均为阳性,其中抗E的抗血清免疫荧光强度最高,与ELISA检测的抗体水平一致.取家兔抗血清对小鼠伯氏疟原虫粗提抗原进行蛋白质印迹(Western blot)分析,产生特异性反应条带,表明能够识别天然的PbAMA-1蛋白.免疫小鼠在以伯氏疟原虫攻击实验中得到部分保护,D Ⅰ、DⅡ、DⅢ和E各免疫组小鼠与佐剂对照组相比,存活时间明显延长(t=2.78,P＜0.05;t=2.67,P＜0.05;t=3.46,P＜0.01和t=3.50,P＜0.01).结论 人工合成的PbAMA-1具有良好的免疫原性和免疫保护作用,完整的胞外区E较其各亚区表现出更好的免疫原性.

关键词：伯氏疟原虫、顶端膜抗原1、表达、免疫原性

所属期刊栏目：25

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30225041

在线出版日期：2007-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5