华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白的纯化、酶学活性及免疫学研究

摘要：

目的体外制备华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH),分析其酶学活性及免疫学特性.方法常规表达重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和纯化试剂盒纯化重组蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用凝血酶和纯化柱酶切、纯化的CsGAPDH免疫BALB/c小鼠,制备抗血清.ELISA检测抗IgG抗体滴度,浓缩型S-P免疫组化3步法检测CsGAPDH抗原在免疫小鼠体内的分布和表达.蛋白质印迹法(Western blotting) 鉴定其抗血清的特异性.建立酶反应体系测定重组蛋白CsGAPDH的酶催化活性.结果纯化蛋白样品呈单一条带.免疫动物获取 CsGAPDH 抗血清,在免疫过程中抗体滴度呈连续上升趋势.CsGAPDH抗原分布和表达于小鼠肌细胞膜部位.免疫小鼠血清具有抗 CsGAPDH特异性抗体.重组蛋白CsGAPDH具有酶生理活性,其酶活力单位为 2 872 U min-1·ml-1.结论制备的重组蛋白 CsGAPD H具有较好的酶活性和免疫原性.

关键词：华支睾吸虫、3-磷酸甘油醛脱氢酶、蛋白质印迹法、免疫原性

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分类号：R532.21;R392.11(寄生虫病)

资助基金：广东省自然科学基金20003026;国家"211"工程建设项目98169;高等学校博士学科点专项科研项目博教No 93-186

在线出版日期：2005-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：231-235