融合基因IFN-α1b/CSPⅡ原核表达载体的构建及在大肠埃希菌中的表达

摘要：

目的构建融合基因IFN-α1b/CSPⅡ的原核表达载体并予以表达. 方法采用聚合酶链反应(PCR)从人基因组DNA中扩增出IFN-α1b基因, 克隆入原核表达载体pGEX-4T-1, 构建原核表达载体pGEX-4T-1/IFN-α1b.利用PCR法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出环子孢子蛋白Ⅱ区(CSPⅡ)基因, 克隆入原核表达载体pGEX-4T-1, 构建原核表达载体 pGEX-4T-1/CSPⅡ . 用限制性内切酶 BamHⅠ和 EcoRⅠ将IFN-α1b从原核重组质粒pGEX-4T-1/IFN-α1b中切下, 克隆入经相同酶切的原核重组质粒 pGEX-4T-1/CSPⅡ中, 构建融合基因的原核表达载体pGEX-4T-1/IFN- α1b/CSPⅡ .融合基因IFN-α1b/CSPⅡ经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导, 在大肠埃希菌中进行初步表达. 结果构建的原核表达载体pGEX-4T-1/IFN-α1b、pGEX-4T-1/CSPⅡ和pGEX-4T-1/IFN-α1b/CSPⅡ经PCR和酶切鉴定与预期结果一致. 证实融合基因IFN-α1b/CSPⅡ拼接成功并正确地克隆入原核表达载体.在大肠埃希菌中表达出融合蛋白IFN-α1b/CSPⅡ, 该融合蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析与理论预测值相符. 经蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定具有免疫原性. 结论构建了融合基因IFN-α1b/CSPⅡ的原核表达载体, 并在大肠埃希菌中表达了融合蛋白 IFN-α1b/CSPⅡ.

关键词：融合基因IFN-α1b/CSPⅡ、环子孢子蛋白Ⅱ、基因重组、序列分析、基因表达

所属期刊栏目：23

分类号：R382.312;R392.11(医学寄生虫学)

在线出版日期：2005-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：43-47