旋毛虫DNA疫苗在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

摘要：

目的观察编码旋毛虫相对分子质量(m)31 000抗原的DNA疫苗(重组真核表达质粒pcDNA3-TspE1)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的体外表达,并分析其表达产物的抗原性.方法通过用阳离子脂质体Lipofectamine2000将重组质粒pcDNA3-TspE1转染CHO细胞,G418筛选阳性克隆,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、间接荧光抗体试验(IFAT)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)对表达产物进行鉴定.结果RT-PCR结果显示,pcDNA3-TspE1转染的CHO细胞在876 bp处有一条带,而用空质粒pcDNA3转染的CHO细胞未出现条带,表明pcDNA3-TspE1转染细胞中有TspE1基因转录.IFAT结果显示,pcDNA3-TspE1转染的CHO细胞与重组融合蛋白免疫小鼠血清反应呈现亮绿色荧光,而pcDNA3转染的CHO细胞及未转染细胞呈现橘黄色.Western blotting显示在pcDNA3-TspE1转染的CHO细胞培养液中存在有一Mr约31 000的蛋白带,且该条带能被重组融合蛋白免疫小鼠血清、旋毛虫肌幼虫可溶性抗原免疫兔血清、感染旋毛虫的小鼠及旋毛虫病患者血清识别.结论重组质粒pcDNA3-TspE1可转染CHO细胞,旋毛虫TspE1基因可在转染的CHO细胞中表达,表达蛋白能分泌到细胞培养上清中且具有旋毛虫抗原性.

关键词：旋毛虫、DNA疫苗、转染、真核表达、中国仓鼠卵巢细胞

所属期刊栏目：22

分类号：R383.15(医学寄生虫学)

资助基金：河南省教育厅自然科学基金20023100014

在线出版日期：2004-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：266-270