粉尘螨Ⅰ类变应原的cDNA克隆测序及亚克隆

摘要：

目的获得粉尘螨Ⅰ类变应原(Der f1)cDNA克隆及亚克隆,并进行测序.方法设计合成引物,从粉尘螨体内提取RNA,经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至pMD-18T,转化大肠埃希菌(E.coli)JM109,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序,将PCR筛检阳性重组子及pET-32a(+)表达载体分别用BamH Ⅰ和Sac Ⅰ双酶切,连接转化至E.coli感受态细胞JM109中过夜培养,挑选菌落进行酶切鉴定.结果从粉尘螨基因组RNA中扩增出Der f1基因,获得pET-32a(+)-Der f1亚克隆,酶切产物的大小与预期相符.结论对粉尘螨Der f1基因进行体外扩增并获得pET-32a(+)-Der f1亚克隆.

关键词：粉尘螨、抗原、cDNA、序列分析

所属期刊栏目：22

分类号：R384.42(医学寄生虫学)

资助基金：安徽省自然科学基金03043303

在线出版日期：2004-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：173-175