mRNA差异显示技术分离猬迭宫绦虫幼虫特异表达基因

摘要：

目的查找猬迭宫绦虫幼虫-裂头蚴阶段特异性表达基因.方法裂头蚴和成虫组织用异硫氢酸胍-步法提取总RNA,用DNA酶去除总RNA中污染的DNA.使用T12MA、T12MC、T12MG和T12MT 4种锚定引物反转录合成cDNA,再用1种随机引物与上述4种锚定引物在含同位素的反应液中进行PCR反应.将PCR产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,经放射自显影后,从凝胶上选出裂头蚴与成虫不同的差异带,PCR扩增后经杂交试验鉴定出不同种类的基因片段;以筛选出的差异带作探针,分别与裂头蚴和成虫RNA进行Northern杂交证实裂头蚴阶段表达基因;将差异带测序后与GenBank中的序列进行同源性比较.结果从凝胶中共选出11条差异带.将回收的11条带再经PCR扩增和杂交试验,从中选出3种不同的基因片段.经Northern杂交证实片段1和片段2为裂头蚴特异表达基因,而片段3为裂头蚴和成虫共同表达的基因.3个基因片段测序后与GenBank中的基因进行同源性分析,基因片断1和2无同源序列;基因片段3与多种生物的28S rRNA同源.结论通过mRNA差异显示技术查找出2个裂头蚴阶段特异性表达基因片段.

关键词：mRNA差异显示、猬迭宫绦虫、PCR、基因、阶段表达

所属期刊栏目：20

分类号：R383.3(医学寄生虫学)

资助基金：河北省科技厅科研项目99276147D

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：14-17