铜绿假单胞菌PAO1中环二鸟苷单磷酸代谢蛋白PA0285感应环境因素的研究

摘要：

目的 分析铜绿假单胞菌中环二鸟苷单磷酸(c-di-GMP)代谢蛋白PA0285感应环境因素的作用,探讨其参与c-di-GMP信号转导的机制.方法 通过PCR技术对pa0285转座子突变菌株进行遗传背景确认;以铜绿假单胞菌野生型PAO1和2株PA0285插入失活突变菌株为研究对象,选定24种化合物,利用绿色荧光蛋白(GFP)报告基因融合法及刚果红结合试验,检测细菌胞内c-di-GMP水平;通过生物膜定量试验分析特定环境因素对细菌生物膜形成的影响;使用CAS平板法进一步分析PA0285在特定环境条件下对细菌分泌嗜铁素的调控.结果 细菌基因组PCR结果表明转座子插入致pa0285基因失活;GFP报告基因融合法、刚果红结合试验及生物膜定量检测结果显示,与野生型PAO1相比,突变菌Δpa0285胞内c-di-GMP水平升高(F=88.92,P＜0.01),生物膜合成增加(F=15.82,P＜0.01);将异亮氨酸(lle)或缬氨酸(Val)添加至培养基时,突变菌 Δpa0285胞内c-di-GMP水平与PAO1相比降低(F=15.17,60.17,P＜0.01),生物膜合成与PAO1比较差异无统计学意义(F=3.462,0.5018,P=0.10001,0.6287).CAS定量检测结果显示,与野生型PAO1相比,突变菌△pa0285分泌嗜铁素含量下降(F=58.22,P＜0.01);CAS平板观察结果显示,无外源化合物添加时,突变菌△pa0285菌落的螯合圈与野生型PAO1相比偏小,将精氨酸(Arg)、MgCl2、CaCl2添加至培养基时,突变菌Δpa0285的菌落螯合圈与PAO1相比大小相近;将Val和Ile添加至培养基时,突变菌 Δpa0285的菌落螯合圈与野生型PAO1相比偏大.结论 铜绿假单胞菌PAO1中代谢蛋白PA0285具有磷酸二酯酶(PDE)的活性;PA0285通过调控胞内c-di-GMP水平,进而影响生物膜合成及嗜铁素的分泌,以感应环境中氨基酸Val和Ile.

关键词：铜绿假单胞菌PAO1、PA0285蛋白、环二鸟苷单磷酸、环境信号

所属期刊栏目：19

分类号：R3;S143.3;S603.2

资助基金：国家自然科学基金;宁夏回族自治区自然科学基金项目

在线出版日期：2024-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：653-658