昆虫杆状病毒系统表达人流感多表位基因盒的研究

摘要：

目的 通过昆虫-杆状病毒表达系统表达人流感病毒多表位基因盒,为进一步研发通用型流感疫苗提供实验依据.方法 将甲型流感病毒H1N1 颈部区(345aa-566aa)和H1/H3/B 亚型HA2 片段经4GS Linker 串联M2e 及ferritin蛋白构成的HA2-M2e-ferritin(简称HMf),参照A/Jilin/JYT-01/2018(H1N1)毒株的全基因组序列,将其HA2基因和HMf基因序列按照昆虫细胞密码子偏好性进行优化合成,经两次双酶切后分别克隆至pFastBacTM双载体中.热激法将重组质粒转化入DH1OBacTM 大肠埃希菌感受态,含目的基因的pFastBacDual-HA2-HMf 转移载体与DH1OBac的Bacmid质粒重组,构建重组转移质粒rBacmid-HA2-HMf.在脂质体介导下,用rB-HA2-HMf转染Sf9 细胞进行重组杆状病毒的拯救.通过限制性酶双酶切、测序、重组Bacmid PCR,Western blot和间接免疫荧光法(IFA)鉴定目的蛋白的表达.用重组杆状病毒感染悬浮sf9细胞,收取细胞悬液,经超速离心、蔗糖密度梯度离心获得重组蛋白,利用透射电镜对重组蛋白进行观察分析.结果 HA2 和HMf 基因共表达,将HA2 全长和HMf 成功插入pFastBacTMDual双顺载体,包装并拯救出携带人流感多表位基因的重组杆状病毒rBDV-HA2-HMf.重组转移质粒pFastBacDual-HA2/HMf经限制性双酶切鉴定,重组穿梭质粒rBacmid-HA2/HMf经菌液PCR鉴定、杆状病毒共表达人流感多表位基因盒经Western blot和IFA鉴定成功,透射电镜下观察到重组蛋白形成的约20 nm 的类病毒样颗粒.结论 成功构建重组杆状病毒,其表达的流感多重保守抗原具有反应原性,为进一步研发通用型流感疫苗奠定了实验依据.

关键词：流感病毒、重组杆状病毒、颈部区结构域、多重保守抗原、疫苗

所属期刊栏目：18

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：长春市科技发展计划项目;吉林省教育厅科学技术研究项目

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：390-394