致小鼠脾脏T细胞凋亡日本血吸虫虫卵抗原蛋白的筛选

摘要：

目的 观察日本血吸虫虫卵致小鼠脾脏淋巴细胞凋亡情况,筛选SEA中致脾脏T细胞凋亡的蛋白组分.方法 采用 TUNEL(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP nick end labeling,TdT 介导的 dUTP 缺口末端标记法)检测日本血吸虫感染鼠脾脏虫卵肉芽肿细胞凋亡情况.制备日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)并免疫小鼠.将小鼠处死,取脾,制备脾细胞悬液,分别以15、30、60 μg/mlSEA刺激脾脏细胞,流式观察脾脏淋巴细胞凋亡情况.用层析柱及超滤管按分子质量将SEA初步分离为4个分子区段,蛋白分别富集于Fr1,＞55 ku;Fr2,30～70 ku;Fr3,5～30 ku;Fr4,＜5 ku.体外分离培养免疫小鼠脾脏细胞,分别加入60 μg/ml的不同SEA区段分子,培养48 h后以Annexin V标记进行流式检测,采用DNA ladder法和RT-PCR检测T细胞中Fas,FasL mRNA水平.将致凋亡作用显著的SEA区段进行SDS-PAGE,电洗脱富集不同亚区段蛋白,再与T细胞共同培养,观察T细胞凋亡比例,进一步缩小蛋白范围区间.结果 TUNEL法检测日本血吸虫感染后8周小鼠脾脏虫卵肉芽肿虫卵周围有细胞凋亡,免疫小鼠T淋巴细胞在60 μg/ml浓度下凋亡比例显著高于其他浓度组,流式检测、DNA ladder法及定量PCR结果均表明Fr1蛋白组分致T细胞凋亡作用最强.将SDS-PAGE电泳后的Fr1分子进行电洗脱,富集不同亚区段蛋白(Fr1-1,Fr1-2,Fr1-3),以60 μg/ml的浓度刺激T细胞48 h,Annexin V法显示Fr1-2(55～72 ku亚蛋白区段)致T细胞凋亡率达57.04％,致凋亡效果最为显著(P＜0.01).结论 虫卵周围高浓度SEA有致小鼠脾脏T细胞凋亡作用,以55～72 ku蛋白区段致凋亡作用最强,可进一步从中筛选疫苗靶蛋白.

关键词：日本血吸虫、虫卵可溶性抗原、T淋巴细胞、凋亡

所属期刊栏目：18

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金No.81772225

在线出版日期：2023-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：37-41