恶性疟原虫环子孢子蛋白的表达及纯化

摘要：

目的 构建His-CSP/pGAPZαA重组表达质粒,转化并筛选阳性His-CSP/pGAPZαA/GS115重组酵母菌,通过发酵和层析纯化获得高纯度His-CSP蛋白.方法 根据葛兰素史克公司RTS'S/AS01疫苗在GenBank公布的基因序列,选择去除14个NANP重复序列,并在其N末端加6个His标签作为目的基因.人工合成的目的基因克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZαA,构建His-CSP/pGAPZαA重组表达质粒.转化酵母菌并筛选阳性转化子.发酵阳性Hiss-CSP/pGAPZαA/GS115重组酵母菌并收获表达产物,经过Ni2+柱亲和层析、阴离子交换层析和分子筛层析纯化Hiss-CSP目的蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化蛋白.结果 成功构建了 His-CSP/pGAPZαA重组表达质粒,筛选到阳性Hiss-CSP/pGAPZαA/GS115重组酵母菌,ELISA检测到表达上清中的His-CSP蛋白.层析纯化产物SDS-PAGE分析纯度＞90％,Western blot分析显示纯化蛋白能被相应抗体识别.结论 在毕赤酵母中成功表达了His-CSP蛋白,并通过发酵和纯化得到高纯度His-CSP蛋白,为建立CSP的ELISA检测方法奠定了基础.

关键词：疟原虫、恶性、环子孢子蛋白、表达、纯化

所属期刊栏目：16

分类号：R382.31(医学寄生虫学)

在线出版日期：2022-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1307-1311