牛型结核分枝杆菌分泌性蛋白MPB70、MPB83基因串联重组质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建牛型结核分枝杆菌(MB)分泌性蛋白mpb 70、mpb 83基因串联重组表达质粒,为进一步利用工程菌表达、获得相应抗原蛋白奠定实验基础. 方法 参考NCBI上公布的MB全基因组序列(EU683972.1),在利用DNAstar7.0生物信息软件分析分泌性蛋白mpb70、mpb83抗原性基础上,选择mpb 70、mpb 83基因编码多肽主要抗原域,利用重叠延伸PCR技术构建pGEX-6p-mpb70+ mpb83串联重组表达质粒. 结果 生物信息学预测MPB70、MPB83基因的抗原域分别在30-171位氨基酸和20-190位氨基酸.在mpb70、mpb 83间加入16位柔性多肽序列,在线分析不影响mpb70和mpb83融合后的抗原性.pGEX-6p-1-mpb 70+mpb83经双酶切获得966 bp和4966 bp两条片段,与预期一致;测序表明mpb70+mpb83融合基因无碱基突变和缺失,重组质粒构建正确. 结论 确定了MB早期标识性分泌性蛋白mpb70、mpb83基因的抗原域,获得了mpb70、mpb83串联基因,构建的重组原核表达载体柔性多肽的引入确保mpb70和mpb83的天然抗原构象且不影响融合蛋白的抗原性,为重组抗原的表达,单克隆抗体制备以及建立MB分泌性蛋白标识物的快速检测试剂盒奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、MPB70基因、MPB83基因、串联表达

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分类号：R383.33(医学寄生虫学)

资助基金：内蒙古自治区科技创新引导项目;内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心开放课题;内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心开放课题;内蒙古自治区草原英才人才工程项目

在线出版日期：2020-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1429-1432