pEGFPN1-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

摘要：

目的 构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2重组表达载体并进行293T细胞的转染表达. 方法 根据pcD-NA3-HBsAg-p30-ROP2重组质粒设计引物,进行PCR扩增,获得HBsAg-p30-ROP2融合基因并进行酶切,酶切片段与pEGFP-N1载体连接,构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体,酶切和测序鉴定后转染293T细胞,采用荧光、Western blot和ELISA检测其蛋白表达效率;分别用P30单抗腹水、ROP2鼠源多抗、乙肝患者血清进行ELISA,检测融合蛋白的免疫反应性. 结果 PCR扩增HBsAg-p30-ROP2基因片段约2 600 bp,与理论值相符.构建的重组质粒pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2经双酶切获到约4 700 bp和约2 600 bp的两条片段,与预期相符.对重组载体测序,HBsAg基因的252位C→A,345位T→C,ROP2基因的695位A→T,且3个碱基突变均为同义突变.免疫荧光法检测pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2转染成功并正确表达,细胞蛋白浓度2.40 mg/ml.提取的融合蛋白能被弓形虫p30单抗腹水、ROP2鼠源多抗和乙肝患者血清识别. 结论 成功构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2重组表达载体,并在293T细胞中过表达,表达蛋白具有免疫反应性,为乙肝和弓形虫联合疫苗的研制奠定了基础.

关键词：pEGFP-N1、载体构建、HBsAg-p30 ROP2、蛋白表达

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分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目81501770;山东省自然科学基金项目2009ZRC03083,ZR2015YL051,ZR2016YL019,ZR2017YL003;山东省医学科学院医药卫生科技创新工程

在线出版日期：2018-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1109-1112,1120