结核分枝杆菌Ag85蛋白复合物的原核表达及其在血清学诊断中的应用研究

摘要：

目的 构建结核分枝杆菌Ag85复合物原核表达载体并表达和纯化重组蛋白,评价该家族蛋白在结核病血清学诊断中的应用价值. 方法 以标准株H37Rv基因组为PCR模板扩增fbpA、fbpB及fbpC基因并克隆至原核表达载体,转化至C43(DE3)菌株后经诱导、表达、纯化获得重组蛋白Ag85A、Ag85B、Ag85C.分别以纯化蛋白包被酶标板,采用方阵滴定确定Ag85A、Ag85B、Ag85C蛋白间接ELISA的最佳条件,用优化的ELISA检测367份健康对照组血清及86份痰涂阳性结核病患者血清中的特异IgM、IgG抗体. 结果 成功构建Ag85复合物基因的重组质粒,经诱导表达获得Ag85A、Ag85B、Ag85C重组蛋白.分别以纯化的Ag85A、Ag85B、Ag85C为包被抗原,采用ELISA检测结核病人血清IgG抗体,灵敏度分别为65.1％、69.8％和41.8％,特异性分别为75.1％、78.1％和64.2％;以Ag85B+ Ag85A或Ag85C IgG抗体阳性为判断标准,检测血清结核分枝杆菌IgG抗体的灵敏度为60.4％,特异性为86.1％. 结论 以Ag85B+Ag85A或Ag85C血清IgG抗体阳性为判断标准,检测血清结核分枝杆菌IgG抗体具有较好的灵敏度与特异性,可作为结核病血清学诊断方法.

关键词：结核分枝杆菌、Ag85复合物、蛋白表达、间接ELISA、血清学诊断

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分类号：R378.911(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家重大研发计划项目No.2017YFD0500304

在线出版日期：2018-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：859-864,869