丙型肝炎病毒解旋酶活性高通量筛选模型的建立

摘要：

目的 建立丙型肝炎病毒(HCV)解旋酶抑制剂高通量筛选模型,筛选抗HCV药物. 方法 应用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的解旋酶活性,并对反应温度、反应缓冲液pH、解旋酶浓度、底物浓度、ATP浓度等反应条件进行优化,建立筛选模型优化反应体系,通过Doxorubicin对反应体系进行验证. 结果 优化的解旋酶模型测定反应体系和条件为:反应温度为22℃,反应缓冲液pH值为7,酶浓度为5 μg/ml,底物浓度为5 nmol/L,ATP浓度为2.5 mmol/L.用优化的FRET测得2μmol/L Doxorubicin对解旋酶的抑制率为(59.1±17.4)％. 结论 建立了HCV解旋酶抑制剂FRET法高通量筛选模型,为新型HCV NS3解旋酶抑制剂的研发奠定了基础.

关键词：丙型肝炎病毒、解旋酶、荧光共振能量转移、高通量筛选模型

所属期刊栏目：13

分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;新世纪优秀人才支持计划;中国医学科学院北京协;医学院协;学者特聘教授项目

在线出版日期：2018-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：588-591