HIV-1gp120三聚体蛋白的小量表达与纯化的方法学研究

摘要：

目的 利用分子生物学方法获得HIV-gp120三聚体蛋白并进行纯化.以期建立一种适合中小型实验室获得HIV-1包膜糖蛋白(Env)的纯化方法. 方法 培养HEK 293T细胞,分别在2％和10％胎牛血清(10％FCS)两种浓度下表达pLH-06044 gp120T-His质粒(gp120T-His),获取表达上清液,以pcDNA3.1(+)空质粒转染上清作对照进行SDS-PAGE电泳,根据BSA系列浓度SDS-PAGE电泳后绘制的标准曲线比较10％FCS与2％FCS培养转染细胞目的蛋白表达量的差异;利用Ni-IDA QTZ 6FF亲和层析以咪唑浓度梯度洗脱2％胎牛血清培养的上清液并以变性及非还原条件进行电泳验证,再降低上样量并以相同方法验证小量纯化的可行性;利用Native PAGE以已知浓度的gp120T为标准溶液绘制标准曲线,计算产量与得率;采用酶联吸附免疫试验(ELISA)与多种广谱中和抗体进行反应,分析产物的活性.结果 通过小量表达与纯化得到较高纯度的06044-gp120三聚体(gp120T-His),纯化后每1 ml转染上清液至少得到约0.5 μg三聚体蛋白,得率约为20％. 结论 采用一步亲和层析法纯化少量gp120 三聚体操作简单,试验成本较低,蛋白得率高,纯度高,活性好.该方法可用于备选免疫原的纯化.

关键词：人类免疫缺陷病毒、包膜糖蛋白、三聚体、纯化

所属期刊栏目：12

分类号：R392

在线出版日期：2018-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1084-1090,1094