蚊寨卡病毒核酸检测体系的建立与初步应用

摘要：

目的 建立敏感、特异的主要适用于蚊媒携带寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的核酸检测体系,构建新型质粒标准分子,并初步应用于广州地区白纹伊蚊野生种群ZIKV感染检测. 方法 从GenBank获取ZIKV全长序列,以MAGE6.0分析比对锚定保守区域作为靶标片段,结合Beacon Designer 7.5、Primer premier 6等设计引物及探针,采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增ZIKV RNA,获得检测靶标片段RZ-1,运用Overlapping PCR在RZ-1中间插入50 bp内含子(mRZ-1),克隆获得ZIKV新型质粒标准分子pBmRZ-1.构建并优化ZIKV巢式逆转录PCR(Nested RT-PCR)和荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测体系,用pBmRZ-1及不同来源的ZIKV标本对检测体系进行敏感性和特异性测试,并用于广州白纹伊蚊野生种群ZIKV检测. 结果 成功构建ZIKV新型质粒标准分子pBmRZ-1及Nested RT-PCR和qRT-PCR检测体系.以pBmRZ-1测试最低检测极限(Limit of detection,LOD) Nested RT-PCR为5copies,qRT-PCR为1copy,qRT-PCR标准曲线拟合线性方程为Y=-3.387LOG(x)+41.43,相关系数R2=0.996,扩增效率为97.4％.该检测体系特异、敏感,能检出蚊虫和细胞感染的ZIKV,411份广州地区白纹伊蚊野生种群标本ZIKV检测阴性. 结论 成功构建了特异、敏感的ZIKV核酸检测体系,可用于蚊ZIKV检测,亦可用于细胞、血清标本的ZIKV检测.新型质粒标准分子pBmRZ-1能甄别标本中可能存在的来源于阳性参照的核酸污染.广州市白纹伊蚊野生种群未检出ZIKV.

关键词：寨卡病毒、核酸检测、新型质粒标准分子、白纹伊蚊

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分类号：R384.1(医学寄生虫学)

资助基金：国家重点研发计划项目2016YFC1200500;广东省科技计划项目2016A020251001;广州市健康医疗协同创新重大专项201508020263;广州市对外科技合作重点项目2012J5100026;国家级大学生创新创业训练计划项目201612121026

在线出版日期：2017-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：811-817,824