刚地弓形虫ROP16-ROP18复合基因真核表达载体的构建

摘要：

目的 构建刚地弓形虫棒状体蛋白16(TgROP16)、棒状体蛋白18 (TgROP18)复合基因真核表达重组质粒,并验证其在真核细胞中的表达情况. 方法 重组质粒pVAX1-ROP16与pVAX1-ROP18分别经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ、NheⅠ和AflⅡ双酶切,将ROP16与ROP18基因先后克隆至双启动子真核表达载体质粒pVAXD的多克隆位点中,构建pVAXD-ROP16-ROP18重组质粒.分别用双酶切和PCR验证正确的重组质粒及对照组质粒转染Hela细胞,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板进行ROP16基因、ROP18基因与管家基因β肌动蛋白基因的RT-PCR扩增,采用间接免疫荧光法检测各自基因的表达. 结果 重组质粒pVAXD-ROP16-ROP18经PCR及双酶切鉴定构建正确.转染后经RT-PCR检测,实验组与对照组β肌动蛋白基因扩增产物均与预期大小相符,实验组ROP16基因、ROP18基因扩增产物分别为1 700 bp和2 100 bp,与预期大小相符,而对照组均未扩增出ROP16及ROP18基因.间接免疫荧光法检测显示,重组质粒pVAXD-ROP16、pVAXD-ROP18转染组细胞可见绿色荧光,空质粒及对照组无绿色荧光. 结论 成功构建了重组质粒pVAXD-ROP16-ROP18,该质粒可在真核细胞中表达.

关键词：刚地弓形虫、棒状体蛋白16、棒状体蛋白18、复合重组质粒、真核表达

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分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：河北省自然科学基金项目No.2013405091;河北北方学院校级重大课题No.ZD201312.

在线出版日期：2017-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：57-61