内含肽介导的天蚕素AD基因工程表达、其酰胺化及应用

摘要：

目的 设计、合成天蚕素AD(CAD)基因序列,与内含肽(Intein)融合表达后通过重组蛋白自剪切作用获得C端酰胺化的CAD,并与抗生素配伍使用. 方法 根据大肠埃希菌密码子偏好性对CAD基因序列进行改造,人工合成目的基因,构建重组质粒pCold-SUMO-CAD-Intein,转化大肠埃希菌,诱导表达重组蛋白,经镍柱亲和层析纯化,后用DTT及肠激酶切割,利用分子筛纯化获得酰胺化CAD,并进行电泳及质谱鉴定.采用微量肉汤法检测重组CAD抑菌活性及其与不同抗生素按不同比例配伍使用的抑菌活性. 结果 PCR扩增目的基因片段为132 bp,与预期一致.质谱显示表达的CAD分子质量单位为3.949 ku,与理论值相符.所得CAD抗菌肽对常见革兰阴性菌抗菌力强,配伍抗生素使用能发挥协同抑菌作用. 结论 成功构建CAD基因重组质粒pCold-SUMO-CAD-Intein,通过与内含肽(Intein)融合表达,经分子内的自剪切作用直接获得C末端酰胺化的抗菌肽,与抗生素配伍使用,能显著降低抗生素用量,具有作为抗生素替代物的应用潜力.

关键词：天蚕素AD、表达、酰胺化、抗生素、配伍

所属期刊栏目：11

分类号：R384(医学寄生虫学)

资助基金：科技型中小企业技术创新基金项目No.14C26213712180.

在线出版日期：2016-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：705-709