恶性疟原虫PfRNaseⅡ的克隆表达与降解特性的初步分析

摘要：

目的 利用原核表达系统诱导表达恶性疟原虫融合蛋白pGEX-PfRNaseⅡ,并分析其RNA降解特性. 方法 分析并选取恶性疟原虫3D7株PfRNaseⅡ的活性区,以cDNA为模板PCR扩增目的片段.将目的片段插入到pGEX-4T-1表达载体中,构建pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒,转化至大肠埃希菌BL21-CodonPlus(DE3),利用IPTG诱导表达目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ.应用Glutathione-SepharoseTM 4B树脂纯化目的蛋白.并用pGEX-PfR-NaseⅡ体外分析PfRNaseⅡ的RNA降解特性. 结果 经PCR、双酶切、测序鉴定,pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒构建正确,转化DE3后在IPTG的作用下表达目的蛋白.纯化的目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ在体外可降解单链RNA,但不能降解双链RNA.pGEX-PfRNaseⅡ在低浓度的Mg2+条件下降解活性较强,高浓度Mg2+条件下活性受到抑制,在5 mmol/L EDTA存在下活性降低. 结论 克隆表达的pGEX-PfRNaseⅡ重组蛋白能水解单链RNA,且该水解活性具有二价金属离子依赖性.

关键词：疟原虫、恶性、PfRNaseⅡ、原核表达、RNA降解

所属期刊栏目：11

分类号：R382.31(医学寄生虫学)

在线出版日期：2016-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：238-241