H5N1亚型流感病毒血凝素(HA)蛋白的表达鉴定及免疫原性研究

摘要：

目的 为了获得H5N1HA蛋白,利用昆虫杆状病毒表达系统表达了A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)的HA基因并获得重组H5N1亚型流感病毒HA蛋白. 方法 将H5N1亚型2.3.2.1谱系的HA蛋白基因扩增并克隆到pFastBacⅠ载体中,构建重组穿梭质粒,转染昆虫sf9细胞后获得重组杆状病毒,对大量培养后表达的H5N1 HA蛋白进行SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光检测.分别在0d和14d用纯化的表达产物HA蛋白免疫小鼠,免疫两周后进行H5N1攻毒试验,记录小鼠体重变化率及生存率. 结果 测序鉴定重组表达载体构建正确;SDS-PAGE显示纯化的表达蛋白分子质量为65 ku;Western blot分析该蛋白能够被兔抗流感病毒IgG识别;鸡抗流感病毒抗体间接免疫荧光法测定HA蛋白的表达,在感染HA的昆虫细胞中出现特异性荧光;攻毒试验表明HA蛋白能够在小鼠体内诱导产生免疫应答并且保护H5N1流感病毒的致死性攻击. 结论 成功的表达了 H5N1的HA蛋白,并且此HA蛋白能成功的诱导小鼠体内的免疫反应,并起到良好的保护作用.

关键词：流感病毒、H5N1 HA、疫苗、杆状病毒表达系统

所属期刊栏目：11

分类号：R373.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：公益性行业农业科研专项No.201303042

在线出版日期：2016-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：209-214