汉滩病毒糖基化位点全突变重组假病毒的制备及鉴定

摘要：

目的 构建汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白(GP)糖基化位点全突变重组假病毒. 方法 应用一次性多位点突变技术同时突变HTNV GP上5个N-糖基化位点(Gn的N134、N235、N347、N399和Gc的N928),克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染293T细胞,包装出重组假病毒颗粒,感染HEK293细胞,采用免疫荧光法检测和鉴定构建的重组假病毒. 结果 基因序列测定显示,突变体上5个N-糖基化位点均由天冬酰胺(Asn)的编码基因(AAT)突变为谷氨酰胺(Gln)的编码基因(CAG);制备的重组假病毒滴度为4.0×107 TU/ml;免疫荧光检测显示构建的重组假病毒可正确表达HTNV的Gn和Gc蛋白. 结论 成功构建了含有HTNV包膜糖蛋白5个N-糖基化位点全突变的重组假病毒颗粒,为研究糖基化对HTNV包膜糖蛋白生物学功能的影响创造了条件.

关键词：汉滩病毒、包膜糖蛋白、糖基化位点全突变体、重组假病毒

所属期刊栏目：11

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项;国家自然科学基金

在线出版日期：2016-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：204-208