狂犬病病毒糖蛋白膜外区重组基因的表达与鉴定

摘要：

目的 构建狂犬病病毒糖蛋白外膜区基因质粒并在大肠埃希菌中表达,为研制狂犬病病毒抗原诊断试剂盒奠定基础. 方法 采用RT PCR方法扩增狂犬病病毒CTN株糖蛋白膜外区基因,目的片段与表达载体PET32a(+)分别经双酶切、胶回收后连接并转化至E.coli BL21(DE3)菌株.阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE分析后进行纯化,利用Western blot鉴定其反应原性. 结果 以狂犬病病毒CTN株为模板扩增的糖蛋白膜外区基因片段经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定大小为1 323 bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定后转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达的融合蛋白分子质量单位大小约为66.6 ku,与理论值相符;重组菌在IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导时间为4h,温度为37℃时蛋白表达产量最高.该融合蛋白主要以包涵体形式存在,可被His标签抗体识别. 结论 成功表达了狂犬病病毒糖蛋白膜外区蛋白,该蛋白反应原性良好,为研制狂犬病病毒抗原诊断试剂盒奠定了基础.

关键词：狂犬病病毒、糖蛋白膜外区、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：10

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金No.81170080

在线出版日期：2015-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：677-680