柔嫩艾美尔球虫病毒RDRP部分序列的克隆及原核表达

摘要：

目的 构建柔嫩艾美尔球虫病毒RNA依赖RNA聚合酶(RDRP)蛋白部分Ⅸ段的原核表达重组质粒,并在大肠埃希菌中表达目的蛋白. 方法 根据柔嫩艾美尔球虫病毒RDRP基因序列设计引物,以病毒基因组dsRNA为模板,RT-PCR扩增目的片段;扩增产物与pMD-18T克隆载体相连接,经测序鉴定序列正确后,将该质粒酶切,酶切目的片段与原核表达载体pET-28a连接构建原核表达质粒,转化入Transetta(DE3)中,经IPTG诱导表达重组蛋白,用SDSPAGE和Western blot分析目的蛋白表达. 结果 成功克隆柔嫩艾美尔球虫病毒RDRP基因部分序列,其长度为1 330 bp,DNA测序表明重组原核表达质粒构建成功,推导的编码氨基酸序列与GenBank中布氏艾美尔球虫病毒RDRP氨基酸序列同源区段同源性为36％.经SDS-PAGE和Western blot分析,柔嫩艾美尔球虫病毒部分RDRP蛋白得到表达,表达蛋白的分子质量单位为52 ku,与理论值相符,且该重组蛋白可被His标签单克隆抗体识别. 结论 构建的重组原核表达载体pET 28a-RDRP在大肠埃希菌中高效表达柔嫩艾美尔球虫病毒RDRP蛋白部分区段,为进一步研究该病毒奠定了基础.

关键词：柔嫩艾美尔球虫病毒、RDRP、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：9

分类号：Q959(动物学)

在线出版日期：2014-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：356-359,363