细粒棘球蚴转化生长因子βⅠ型受体胞内域原核表达载体的构建及蛋白纯化

摘要：

目的 构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)转化生长因子βⅠ型受体胞内域(transforming growth factor-β type Ⅰ receptor intracellular domain,TββRⅠ-Ⅰ)原核表达载体,诱导表达并纯化EgTβRⅠ-Ⅰ蛋白.方法 采集感染Eg的羊源原头蚴,Trizol法提取原头蚴总RNA,RT-PCR扩增EgTβR Ⅰ-Ⅰ基因片段,克隆至原核表达载体pET28a(+),经限制性内切酶双酶切和序列鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌感受态细胞BL21,异丙基-pn硫代半乳糖苷(ⅠPTG)诱导表达,经镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达.结果 pET28a-EgTβRⅠ-Ⅰ原核表达载体构建成功,经IPTG诱导可表达EgTβRⅠ-Ⅰ蛋白(分子质量单位为48 ku),纯化后获得大量纯度较高的可溶性蛋白.结论 成功构建pET28a-EgTβRⅠ-Ⅰ原核表达载体,并获得纯化的可溶性目的蛋白,为研究EgTβRⅠ-Ⅰ在Eg体内的生物学作用及其作用方式奠定了基础.

关键词：细粒棘球绦虫、转化生长因子受体Ⅰ、基因表达、蛋白纯化

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分类号：R383.33(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金项目81260252,81101271;长江学者和创新团队发展计划IRT1181

在线出版日期：2014-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1089-1092