弓形虫Rhomboid-1蛋白基因的克隆及原核表达

摘要：

目的 克隆并原核表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Rhomboid-1 (TgROM1)蛋白. 方法 收集、纯化弓形虫速殖子,用Trizol法提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增TgROM1基因,回收的PCR产物与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-TgROM1.将重组克隆质粒亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-TgROM1并转化至Rosetta感受态,用IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 成功克隆了643 bp的TgROM1基因,双酶切鉴定重组表达质粒pGEX-4T-1-TgROM1构建正确.SDS-PAGE检测重组表达质粒表达的TgROM1蛋白分子质量约为48 ku,Western blot检测表明该蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别.结论 成功克隆了弓形虫ROM1基因并原核表达了具有反应原性的重组TgROM1蛋白,为该蛋白的功能研究奠定了基础.

关键词：弓形虫、Rhomboid蛋白、克隆、原核表达

所属期刊栏目：8

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

在线出版日期：2013-11-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：903-906