莱姆病螺旋体优势抗原BmpA分子克隆、高效表达与亚细胞地位

摘要：

目的 以伯氏疏螺旋体标准株B31株基因组DNA为模板,PCR扩增bmpA全基因序列,定向克隆和高效表达重组BmpA并纯化. 方法 1)以伯氏疏螺旋体标准株B31株基因组DNA为模板,设计定向克隆引物,PCR扩增bmpA全基因序列,定向克隆入表达载体pGEX-6p-1,酶切鉴定后转化大肠埃希菌BL21菌株,获得bmpA重组菌；2)从重组菌培养温度,诱导时间,诱导剂的剂量,菌密度(A600)等方面优化诱导条件,确定高效表达重组BmpA的最佳方案；3)用GSH柱纯化重组BmpA,探索纯化BmpA的最佳条件. 结果 1)在基因水平和蛋白水平上均得到目的条带和目标峰,确定表达载体bmpA-pGEX 6p-1构建成功并表达重组BmpA；2)重组质粒在37℃,IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为6h,菌液的A600值为0.5～1.0以及在LB培养基上培养GST-bmpA融合蛋白表达量达到最大；3)在最佳表达条件下1L重组菌能得到2.9～3.1 mg纯化BmpA蛋白. 结论 成功构建了表达重组蛋白BmpA的大肠埃希菌原核表达系统,确定了高效表达重组BmpA的最佳方案,并证明用GSH柱纯化重组BmpA效果较好.

关键词：莱姆病、伯氏疏螺旋体、BmpA、分子克隆、高效表达

分类号：R377(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目81060134;云南省自然科学基金项目2007C069M,2010CD221,2011FB244;云南省教育厅科学研究基金项目08Y0240

在线出版日期：2013-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：801-806