变异链球菌腺苷磷酸硫酸酶的原核表达及功能研究

摘要：

目的 构建变异链球菌aps基因原核表达载体,表达纯化目的蛋白,继而对其生物学功能进行初步鉴定. 方法 以变异链球菌UA159株基因组DNA为模板PCR扩增变异链球菌aps基因编码区,插入原核表达载体pASK-IBA43 plus,转化E.coli Top 10,无水四环素诱导His-APS蛋白表达,经Ni-NTA纯化后,检测His-APS蛋白腺苷磷酸硫酸酶活性及核糖核酸酶活性. 结果 PCR扩增出933 bp的aps基因开放读码框,成功构建aps基因原核表达载体pASK-aps,并在E.coli Top 10中诱导表达,SDS-PAGE检测重组His-APS蛋白分子质量单位为38 ku,该蛋白在Mg2+及Mn2+存在条件下能水解pAp,且呈时间及浓度依赖性,但不能降解Cy5标记的随机6nt寡核苷酸探针. 结论 重组His-APS蛋白具有腺苷磷酸硫酸酶活性,呈时间及浓度依赖性,但不具有核糖核酸酶活性.

关键词：变异链球菌、腺苷磷酸硫酸酶、核糖核酸酶

所属期刊栏目：7

分类号：R378.12(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目81000762;福建省自然科学基金项目2010D018;福建省卫生厅青年基金2010-2-90

在线出版日期：2013-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：724-727