泡球蚴感染小鼠IL-17基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立与检测

摘要：

目的 建立检测泡球蚴感染小鼠IL-17的实时荧光定量RT-PCR方法.并用于泡球蚴病小鼠IL-17基因检测.方法 通过腹腔注射100 μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型,感染1个月后处死,提取肝脏总RNA,反转录得到cDNA;登陆GenBank,得到IL-17基因(U43088.1)全序列,选取保守序列,应用primer 5设计引物,β-actin作为内参,以10倍梯度稀释IL-17 PCR产物为标准品.进行实时荧光定量RT-PCR以确定方法的特异性和灵敏度;绘制标准曲线,确定IL-17基因检测的最佳条件. 结果 用建立的实时定量RT-PCR检测IL-17基因无非特异性扩增,各样品熔解温度均在81.0℃.熔解峰单一;mRNA检出限为1 × 102Pg,106～102pg总RNA均有扩增;泡球蚴感染1个月后,IL-17基因表达显著增加,感染组和对照组分别为(0.008728±0.000984)和(0.003823±0.00082).差异有统计学意义(P<0.05). 结论 成功建立了小鼠源IL-17基因实时定量RT-PCR检测体系.经检测,小鼠感染泡球蚴1个月后IL-17基因表达增加,表明IL-17在泡球蚴感染免疫调节中可能起重要作用.

关键词：泡球蚴、实时荧光定量RT-PCR、IL-17、SYBR Green I

所属期刊栏目：06

分类号：R383.33(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金;新疆包虫病基础医学重点实验室开放基金

在线出版日期：2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：35-38