中国人源蓝氏贾第鞭毛虫ppdk基因的克隆及其表达产物的鉴定

摘要：

目的 获取中国人源性蓝氏贾第鞭毛虫ppdk基因及相关基因产物方法以中国人源性贾第虫基因组DNA为模板,设计引物进行PCR扩增,获取ppdk基因并进行测序分析.筛选得到的阳性克隆连接至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体,并转化宿主菌大肠埃希菌感受态细胞E.coli BL21(DE3),进行重组蛋白的IPTG诱导表达.收集重组表达产物进行亲和层析纯化,再用Western blot进行免疫学分析鉴定.结果 序列测定分析可知,获得的阳性克隆插入片段包含一个2 655 bp的开放阅读框架;比对其基因序列发现,其与ATCC 50803(美国WB虫株C6株)的同源性可高达99%.该基因片段编码884个氨基酸,预测其表达蛋白的分子质量单位大小约为97.6 ku.Western blot显示该基因序列的原核表达产物能够被抗6个组氨酸标签的特异性抗体识别,提示重组表达产物为实验预期的目的 蛋白.结论 对贾第虫ppdk基因进行了克隆及原核表达,并对表达产物进行了纯化和免疫学初步鉴定,为贾第虫病治疗的高通量药物筛选等的研究奠定了基础.

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫、ppdk、克隆、原核表达、鉴定

所属期刊栏目：05

分类号：R382.2(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30872207

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：834-839