华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析

摘要：

目的通过筛选华支睾吸虫成虫cDNA质粒文库,寻找、识别新基因,并将其编码区克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中,表达出融合蛋白,为进一步研究其功能奠定基础. 方法用文库通用引物对华支睾吸虫cDNA 质粒文库进行PCR扩增,对产物为500 bp以上的质粒进行测序,测序结果在NCBI 和ExPasy 网站上进行序列分析,识别华支睾吸虫新基因,并应用ORFfind、ClustalW、NCBI Conserved Domain Search等程序对其进行开放阅读框、进化树及结构域分析.根据pGEX-4T-1上的多克隆位点及所发现的新基因cDNA 编码序列设计引物,进行PCR 扩增,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体pGEX-4T-1 上.构建的重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,并对鉴定过的重组体进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定. 结果发现CsGAPDH 基因,完整阅读框含1 017 个碱基对,编码339 个氨基酸,理论分子质量单位为37.024 09 ku ,理论pI 为6.66 .序列分析显示,CsGAPDH与曼氏血吸虫GAPDH的同源性为78%,具有GAPDH保守功能域.所构建的重组原核表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符.SDS-PAGE电泳显示表达产物在63 ku处有1条特异性条带. 结论发现华支睾吸虫GAPDH基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.

关键词：华支睾吸虫、磷酸甘油醛脱氢酶、克隆、原核表达、序列分析

所属期刊栏目：18

分类号：R383.22(医学寄生虫学)

资助基金：广东省自然科学基金;广东省科技厅科技计划2002B31005;广东省广州市科技攻关项目200223-E4022

在线出版日期：2005-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：28-32