粉尘螨Ⅱ类抗原cDNA原核表达质粒的构建与表达

摘要：

目的构建粉尘螨Ⅱ类抗原cDNA基因的重组表达质粒,并在大肠埃希菌中表达. 方法采用亚克隆技术,用SacⅠ和NotⅠ从重组质粒pMD-18T- Der f 2上切下Der f 2 cDNA片段,插入表达载体pET-32a(+)质粒,转化大肠埃希菌BL21,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性重组子,并经双酶切及PCR扩增鉴定.重组质粒pET-32a(+)-Der f 2转化大肠埃希菌,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和薄层凝胶扫描定量分析. 结果对重组质粒进行酶切和PCR鉴定,获得455 bp大小的目的基因片段,与预期结果相符,证明已成功构建携带Der f 2基因的重组原核表达质粒pET-32a(+)-Der f 2.核酸序列测定及同源性分析证实,所构建的原核表达质粒pET-32a(+)-Der f 2中所含的Der f 2 cDNA片段与GenBank中的Der f 2序列同源性达到100%.Der f 2 cDNA在大肠埃希菌诱导表达后获得分子质量单位为34 ku的蛋白,蛋白含量占菌体蛋白含量的16%. 结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类抗原cDNA基因的重组表达质粒pET-32a(+)-Der f 2,并在大肠埃希菌中获得高效表达,为获得重组纯化Der f 2变应原并用于尘螨变应性疾病的诊治奠定基础.

关键词：粉尘螨、抗原、cDNA、基因重组、原核表达

所属期刊栏目：17

分类号：R384.4(医学寄生虫学)

资助基金：安徽省自然科学基金03043303

在线出版日期：2005-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：369-371