鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体TaqMan-MGB双重荧光定量PCR检测方法的建立和应用

摘要：

为建立一种快速鉴别诊断鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的方法,试验针对鸡毒支原体pvpA基因和鸡滑液囊支原体vlhA基因保守序列,分别设计引物和TaqMan-MGB探针;人工合成包含荧光PCR扩增目的基因的序列,并与载体连接后构建重组质粒MG-pvpA和MS-vlhA,测序正确后作为标准质粒;优化反应条件建立了 MG和MS的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法,对方法的敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测.结果显示,该方法特异性良好,与其他常见鸡病原不发生交叉反应,检测MG-pvpA、MS-vlhA的灵敏度分别达到1.58×101拷贝/μL、1.21×101拷贝/μL,批内与批间的变异系数均小于2％,从36份临床样品中分别检出MG和MS阳性样品11份、8份,与商品荧光PCR试剂盒符合率达到100％.研究表明建立的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法特异性强、重复性好、敏感性高,可用于检测临床样品,快速准确地鉴别MG和MS,有利于鸡群中支原体的监测和净化.

关键词：鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体、荧光定量PCR、净化

所属期刊栏目：44

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：日照市动物防疫项目;日照市动物疫病防控项目;日照市动物疫病防控项目

在线出版日期：2023-02-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：59-64