SIRT1/NF-κB通路在氧糖剥夺再灌注诱导小鼠海马神经元损伤中的作用

摘要：

目的 探讨沉默信号调节因子1(SIRTl)/细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路在氧糖剥夺再灌注诱导海马神经元损伤中的作用.方法 通过SIRT1过表达慢病毒和RNAi技术调控小鼠海马神经元SIRT1的表达后建立氧糖剥夺再灌注损伤模型,实验设置七组:对照组(Control组)、氧糖剥夺再灌注损伤模型组(OGD组)、OGD+转染SIRT1-siRNA质粒组(OGD+SIRTI-siRNA组)、OGD+转染空载质粒组(OGD+ NC-siRNA组)、OGD+感染过表达SIRT1慢病毒组(OGD+ SIRT1上调组)、OGD+感染空载慢病毒组(OGD+ Vector组)及OGD+ SIRT1上调+ SIRT1-siRNA组.对照组在37℃常氧条件下培养,其余六组在经过相应处理后给予氧糖剥夺处理9h及再灌注处理24 h,再灌注处理结束后采用CCK-8法测定细胞活力、化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量、流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR法检测SIRT1、NF-κB的mRNA表达量,Western blot检测SIRTl、NF-κB、IκBα、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、β-actin 、TBP的表达量.结果 与Control组比较,OGD组细胞活力(％:100 vs.53.83±1.88)、SIRT1蛋白表达量(0.62 ±0.06 vs.0.33 ±0.03),IκBα蛋白表达量(1.01 ±0.06 vs.0.42±0.03) 、Bc1-2/Bax比值(2.64 ±O.34 vs.0.58±0.06)明显降低(P＜0.05),LDH释放量(U/mL:1.12±0.17 vs.2.76±0.23),细胞凋亡率(％:8.46±1.77 vs.29.58 ±1.84),NF-κB蛋白表达量(0.23±0.03 vs.0.63±0.03),Cleaved caspase-3蛋白表达量(0.19±0.03 vs.0.82±0.04)明显升高(P＜0.05);与OGD组和OGD+ Vector组比较,OGD+ SIRT1上调组细胞活力(％:53.83±1.88、50.33 ±3.83 vs.72.77±1.80) 、SIRT1表达量(0.63 ±0.03、0.58 ±0.04 vs.1.02 ±0.05)、IκBα表达量(0.42±0.03、0.38±0.04 vs.0.62±0.04)及Bcl-2/Bax比值(0.58±0.06、0.55±0.04 vs.1.41 ±0.16)明显升高(P ＜0.05),LDH释放量(U/mL:2.76 ±0.23、2.91 ±0.25 vs.1.95±0.20)、细胞凋亡率(％:29.58 ±1.84、28.87 ±2.91 vs.20.61±2.81)％、NF-κB表达量(0.63±0.03、0.58 ±0.04 vs.0.35 ±0.04) 、Cleaved caspase-3表达量(0.82±0.04、0.71 ±0.05 vs.0.46±0.04)明显降低(P＜0.05);与OGD组和OGD+NC-siRNA组比较,OGD+ SIRT1-siRNA组细胞活力(％:53.83 ±1.88、49.23 ±3.12 vs.34.86 ±3.17) 、SIRT1表达量(0.33 ±0.03、0.32 ±0.04vs.0.18 ±0.04) 、IκBα表达量(0.42 ±0.03、0.46 ±0.05 vs.0.27 ±0.04)及Bcl-2/Bax比值(0.58 ±0.06、0.62 ±0.05 vs.0.15 ±0.02)明显降低(P ＜0.05),LDH释放量(U/mL:2.76±0.23、2.78±0.24 vs.3.51 ±0.31)、细胞凋亡率(％:29.58±1.84、28.52±2.08 vs.37.03±3.19) 、NF-κB表达量(0.63±0.03、0.64±0.04 vs.0.93±0.05)、Cleaved caspase-3表达量(0.82±0.04、0.85±0.05 vs.1.12±0.13)明显升高(P＜0.05).结论 SIRT1/NF-κB通路参与了氧糖剥夺再灌注诱导小鼠海马神经元损伤过程.

关键词：氧糖剥夺再灌注损伤、沉默信号调节因子1、细胞核因子-κB、海马神经元

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资助基金：国家自然科学基金81560193;南昌大学第二附属医院科技计划青年基金2016YNQN12008

在线出版日期：2019-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：382-387