MYo Cx43基因转染大鼠成纤维细胞产生电偶联能力细胞实验研究

摘要：

目的 通过观察转染生肌调节因子(myoblast determination,MyoD)基因和连接蛋白43(Connexin)基因的大鼠真皮成纤维细胞(dermal fibroblast,DFs)生物学功能的变化,探讨Myo和Cx43基因转染DFs细胞在治疗心律失常中意义.方法采用Gateway技术,构建真核质粒表达载体,利用慢病毒(LV)表达系统,将大鼠MyoD cDNA和Cx43 cDNA转入大鼠成纤维细胞中,经Biasticidin筛选培养,通过RT-PCR、Western blot及膜片钳技术等方法检测MyoD及Cx43蛋白及mRNA表达情况及离子电流变化,并且通过显微镜观察转染后生长情况,免疫组织化学检测肌动蛋白和结蛋白的表达.结果 RT0-PCR,Western blot检测出MyoD及Cx43蛋白及相应mRNA表达,显微镜观察到基因转染筛选后,培养1周细胞的融合现象,并有多核肌管形成及连接蛋白形成.免疫组织化学检测可见其下游蛋白Desmin及α-actin呈现阳性表达,膜片钳检测到转染后钙离子及钠离子电流改变.结论 MyoD和Cx43基因转染使DFs分化为可兴奋偶联细胞,为进一步研究基因治疗心律失常奠定基础.

关键词：生肌调节因子、连接蛋白43、基因转染、成纤维细胞、心律失常

所属期刊栏目：28

分类号：R344.13;Q273(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金30471719;上海市浦东新区优秀学科带头人项目PWR200-1

在线出版日期：2008-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：235-238,插1