萝卜硫素促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制研究

摘要：

目的 探讨萝卜硫素(Sul)促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的分子机制.方法 将BMSCs分为对照组(不做任何处理)、诱导组(诱导成骨分化)、诱导+Sul组(诱导成骨分化并加入40 µmol/L Sul);分别向BMSCs转染腺病毒-shRNA-Mock、-shRNA-TET1、-shRNA-TET2、-shRNA-TET3,作为shRNA-Mock组、shRNA-TET1组、shRNA-TET2组、shRNA-TET3组;BMSCs于含成骨分化诱导培养液及添加40 µmol/L Sul的细胞培养液中培养,然后转染腺病毒-shRNA-TET1、-shRNA-TET2、-shRNA-TET3、-shRNA-Mock,作为诱导+Sul+shRNA-TET1组、诱导+Sul+shRNA-TET2组、诱导+Sul+shRNA-TET3组、诱导+Sul+shRNA-Mock组.qPCR法和Western blot法测定BMSCs向成骨细胞分化后Runx2 mRNA和蛋白的表达水平.染色质免疫共沉淀(ChIP)实验测定BMSCs向成骨细胞分化后,与Histone H3结合的Runx2启动子区DNA含量.HpaⅡ酶和MspⅠ酶消化联合qPCR法测定BMSCs向成骨细胞分化后Runx2启动子区的甲基化水平.茜素红染色测定BMSCs向成骨细胞分化的程度.结果 与诱导组相比,诱导+Sul组Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显上升(P<0.05),与Histone H3结合的Runx2启动子区DNA含量增高(P<0.05),Runx2启动子区的甲基化水平降低(P<0.05),茜素红染色评分升高(P<0.05).与诱导+Sul组相比,诱导+Sul+shRNA-TET1组细胞内与Histone H3结合的Runx2启动子区DNA含量降低(P<0.05),Runx2启动子区的甲基化水平升高(P<0.05),茜素红染色评分明显降低(P<0.05);而诱导+Sul+shRNA-TET2组、诱导+Sul+shRNA-TET3组及诱导+Sul+shRNA-Mock组则无明显变化(P>0.05).结论 Sul能够通过TET1促进Runx2启动子区DNA去甲基化,促进BMSCs向成骨细胞分化.

关键词：骨髓间充质干细胞、成骨分化、萝卜硫素、Runx2、表观遗传学、DNA甲基化

所属期刊栏目：33

分类号：R394.2

资助基金：湖北省卫生健康委员会科研项目WJ2021M044

在线出版日期：2024-01-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：24-29