人卵泡抑素基因真核表达载体构建和体外表达

摘要：

目的:体外构建携带人卵泡抑素基因(FS)cDNA的真核表达载体,并观察其在幼年叙利亚地鼠肾细胞(BHK21)中的表达.方法:从新鲜人卵泡抽提液细胞中提取RNA,应用RT-PCR方法扩增人FS cDNA序列,克隆到pMD-18T载体中,构成pMD-FS重组克隆质粒.经测序鉴定后,双酶切得到人FS基因cDNA序列,插入到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-FS重组表达质粒.pECFP-FS重组表达质粒经酶切和PCR鉴定,通过脂质体2000介导瞬时转染BHK21细胞,并检测绿色荧光蛋白(GFP)的荧光表达.结果:成功构建pMD-FS重组克隆质粒,FS cDNA序列测序结果与GenBank中公布的序列(Genbank NM_013409.1)同源性为100%;成功构建pEGFP-FS重组表达质粒,将其转染BHK21细胞后,观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:本实验成功构建了人FS的pMD-FS重组克隆质粒和pEGFP-FS重组表达质粒,为进一步研究FS对哺乳动物卵泡发育的影响奠定了基础.

关键词：卵泡抑素、真核表达载体、基因转染、绿色荧光蛋白

所属期刊栏目：19

分类号：R52;R78

资助基金：桂人口计生研0905

在线出版日期：2011-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：210-212,220