流行性腮腺炎病毒荧光定量逆转录-聚合酶链反应快速检测方法的建立

摘要：

目的 建立以TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),用于检测流行性腮腺炎(腮腺炎)病毒(MuV)核酸.方法 针对MuV血凝素(H)基因保守区域设计特异性引物与TaqMan-MGB荧光探针,筛选并优化荧光定量RT-PCR反应体系与反应条件,用以提高方法的特异性、灵敏度与准确性;并通过体外克隆技术建立MuV基因拷贝数定量分析模型.结果 引物与探针的优化浓度分别为880mmol/L和280mmol/L,具有良好的保守性和特异性,与其它呼吸道病毒均无交叉反应;方法检测灵敏度为10拷贝/反应,相当于0.01TCID50,标准曲线线性范围为107～10拷贝/反应;从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,操作简便,重现性好.结论 TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法特异、敏感、快速,为MuV的早期快速检测提供了一种新的检测技术.

关键词：流行性腮腺炎病毒、荧光定量逆转录-聚合酶链反应、TaqMan-MGB探针

所属期刊栏目：12

分类号：R5(内科学)

资助基金：浙江省科学技术厅攻关项目

在线出版日期：2006-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：394-398