10.3760/cma.j.issn.1008-6706.2022.06.009
他莫昔芬缓解高糖诱导大鼠腹膜上皮-间质转分化的机制研究
目的:观察他莫昔芬(TAM)对高糖诱导大鼠腹膜上皮-间质转分化(EMT)的作用及其机制。方法:2015年1月至2016年6月取正常SD雄性大鼠腹膜,原代培养腹膜间皮细胞,分为空白对照组、高糖刺激组和药物干预组。高糖刺激组:60 mmol/L高浓度葡萄糖刺激诱导大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)发生EMT。药物干预部分:(1)予高糖、不同浓度梯度的他莫昔芬(0.5 μmol/L,2 μmol/L)干预刺激RPMCs 72 h提取蛋白。(2)予高糖、2 μmol/L 他莫昔芬或同时予2 μmol/L ER-α阻断剂干预RPMCs 1 h提取蛋白和6 h提取RNA。(3)予高糖、2 μmol/L 他莫昔芬或同时予1 μmol/L蛋白酶体抑制剂干预RPMCs 1 h提取蛋白。Western blot分析E-cadherin、α-SMA、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad4蛋白含量的变化,实时荧光定量聚合链式反应(PCR)检测Smad2、Smad3、结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的mRNA表达变化。结果:他莫昔芬能够改善EMT表现,可使高糖刺激诱导下的RPMCs表达E-cadherin回升,α-SMA下降,且随着药物浓度的增加,效果更为显著(
t
E-cadherin=2.31、
t
α-SMA=-2.53,均
P < 0.05)。高糖刺激TGF-β1/R-Smad信号通路的Smad2/3蛋白磷酸化水平及CTGF、PAI-1的mRNA表达增加,他莫昔芬干预可显著下调上述蛋白及相关靶基因的mRNA表达(
t
p-Smad2=-3.38、
t
CTGF=-3.81,均
P < 0.05),引入ER-α阻断剂可阻断此抑制作用。蛋白酶体抑制剂可减弱他莫昔芬对p-Smad2的抑制作用,提升p-Smad2/3蛋白水平(
t
p-Smad2=3.94,
P < 0.05)。
结论:他莫昔芬激活腹膜间皮细胞上的ER-α,通过减少p-Smad2蛋白水平而减弱TGF-β1/R-Smad信号通路活性,有效缓解高糖刺激诱导的EMT进程,此抑制作用可能是通过蛋白酶体途径降解p-Smad2蛋白而产生。他莫昔芬在EMT中的作用可为腹膜纤维化的研究和防治提供可能的方向。
上皮、间质细胞、细胞转分化、他莫昔芬、转化生长因子β1、选择性雌激素受体调节剂、腹膜透析
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国家自然科学青年基金81900694;the National Natural Science Foundation of China Youth Program81900694
2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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