人呼吸道粘液分泌体外实验方法的建立

摘要：

目的建立研究人类呼吸道粘液分泌的体外实验方法.方法直径小于3 mm的小支气管组织(HSBT)剪碎后被均匀地放入24孔培养板中.分别记录基础粘蛋白分泌量(BM)和激发粘蛋白分泌量(SM),SM用超过BM的百分率表示.在含50 nmol/L视黄酸的BEGM与DMEM(1∶1)混合液中进行支气管粘膜上皮的原位培养,在带半透膜的插入培养板中培养正常人支气管上皮细胞(NHBE).MUC5AC粘蛋白ELISA以其多克隆抗体为一抗,绵羊抗兔IgG为二抗,邻苯二甲酰胺显色.酶连二花（艹禾）豆凝集素(DBA)试验(ELDBAA)以DBA铺盘以便与粘蛋白结合,用过氧化物酶标记的DBA识别被捕捉的粘蛋白.结果 MUC5AC ELISA的敏感性为10 ng/ml,而ELDBAA为30 ng/ml.经过3 h培养,HSBT的基础MUC5AC和DBA粘蛋白分泌量分别为11和19 ng/mg组织.原位培养的支气管粘膜上皮细胞3 h积聚的粘蛋白分泌量分别为MUC5AC粘蛋白793～1 868 ng/孔和DBA粘蛋白290～2675 ng/孔.NHBE细胞在气液界面形成后的第6 d,3 h积聚的基础DBA粘蛋白分泌量为22 ng/孔.结论上述组织和细胞培养以及粘蛋白测量方法的建立为呼吸道粘液分泌的研究奠定了良好基础.

关键词：粘蛋白、MUC5AC、二花(艹禾)豆凝集素、支气管

所属期刊栏目：2

分类号：R563(呼吸系及胸部疾病)

资助基金：国家自然科学基金30140023

在线出版日期：2004-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：351-354