膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制的研究
目的：使用膝关节骨性关节炎（ OA）临床组织标本与人软骨细胞株（ NHAC），以分子生物学手法探讨WISP-1在骨关节软骨基质合成和分泌中的调控机理，明确其在骨性关节炎中的作用。方法 NHAC细胞以1.4×106／mL密度播种于6孔板（直径3．5 cm）后培养48 h，于含有0．2％牛血清白蛋白（ BSA）的DF中继续培养12 h，使细胞处于静止状态。向含0．02％BSA的DF培养基中加入10、50和100 ng／mL的 Wnt 刺激细胞6 h。对照 siRNA 与β-catenin siRNA，使用 EntranserTM-R （ Engreen）转染试剂转染至NHAC。转染24 h后使用PBS清洗细胞两次。向含0.02％BSA的DF培养基中加入50 ng／mL的Wnt刺激细胞。向NHAC负荷不同剂量WISP-1，24 h后观察MMPs和ADAMTS4。利用总RNA提取试剂盒提取组织标本和细胞RNA，反转录产物cDNA作为PCR扩增模板进行定量PCR；使用蛋白提取试剂盒提取蛋白。结果在膝关节组织标本中发现，在骨性关节炎关节软骨中WISP-1、Wnt和b-catenin基因表达及蛋白水平明显增高。在NHAC细胞，Wnt诱导下WISP-1转录水平显著提高，与Wnt呈现剂量依赖关系。经敲除内源性β-catenin表达后，Wnt诱导WISP-1作用明显降低。 WISP-1以量依存性的诱导细胞外基质蛋白分解酶MMP3、MMP9、MMP13和ADAMTS4基因表达在软骨细胞中Wnt诱导WISP-1信号途径通过β-catenin的可能性很大。结论 WISP-1与骨性关节炎的发生具有一定的相关性；在软骨细胞中Wnt诱导WISP-1的信号途径通过b-catenin。
膝关节骨性关节炎、软骨细胞、WISP-1、信号传导、细胞外基质
R684.3(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
国家自然科学基金项目81071499
2015-06-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
537-540,549
