SEDT-PA致病基因WISP3突变体的构建及在COS-7细胞中的表达定位

摘要：

目的 通过构建晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病(SEDT-PA)致病型(1000 T-C,840delT)Wnt诱导分泌蛋白3(WISP 3)与绿色荧光蛋白融合表达的真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,为研究WISP 3突变致SEDT-PA的机理奠定基础.方法 从正常人软骨细胞获得野生型WISP 3基因的全长cDNA(WT-WISP 3);定点突变方法构建携带WISP 3基因致病型的重组真核表达质粒MUT1000 T/C/pEGFP-C 2和MUT840 delT/pEGFP-C 2;以空白载体pEGFP-C 2为对照,脂质体转染法将重组质粒瞬时转染COS-7细胞,48 h后用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达;半定量RT-PCR法检测WISP 3基因的表达.结果 测序和酶切鉴定证实插入片段大小和序列的正确;突变体在COS-7细胞中均高效表达;荧光显微镜观察发现,转染野生型WISP 3基因的COS-7细胞中绿色荧光均匀分布在细胞浆和细胞膜,转染突变体的COS-7细胞中荧光呈斑点状染色和聚集现象.结论 成功构建了SEDT-PA致病基因WISP 3突变体,且发现野生型WISP 3蛋白定位于细胞浆和细胞膜,而突变型的WISP 3蛋白在细胞浆内异常聚集,为进一步探讨SEDT-PA的发病机制创造条件.

关键词：SEDT-PA、WISP3、突变体、定点突变、亚细胞定位

所属期刊栏目：12

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30400218

在线出版日期：2007-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：554-560