10.3969/j.issn.1006-7108.2005.02.008
人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力.方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs)进行感染.采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度.结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功,病毒滴度可达2.5×109pfu/ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含hOPG重组腺病毒载体.
骨保护素、腺病毒、同源重组、基因治疗
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R3(基础医学)
2005-07-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共4页
167-170