miR-21-5p靶向TNFAIP3对大鼠骨关节炎软骨细胞损伤的影响

摘要：

目的 探讨miR-21-5p靶向肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factor alpha-inducible protein 3,TNFAIP3)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠软骨细胞损伤的影响.方法 于大鼠关节软骨中分离培养软骨细胞,分为对照组(control组)、白介素(interleukin,IL)-1β组(10 ng/ml)、IL-1β+antagomir-NC组、IL-1β+miR-21-5p antagomir组、IL-1β+miR-21-5p antagomir+si-NC组、IL-1β+miR-21-5p antagomir+si-TNFAIP3组.给予相应的干预后,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)检测软骨细胞中miR-21-5p和TNFAIP3、Ⅱ型胶原纤维α1基因(typeⅡcollagen fiberα1 gene,COL2A1)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin 5,ADAMTS5)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的mRNA表达水平;酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测软骨细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和IL-6水平;Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测软骨细胞增殖活性;流式细胞术检测软骨细胞凋亡;免疫荧光染色分析软骨细胞磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)的核易位;Western blot检测软骨细胞TNFAIP3、p-NF-κB p65、NF-κB p65和核因子κB抑制因子α(IκBα)蛋白表达.体内实验中将SD大鼠分为假手术组、模型组、antagomir-NC组、miR-21-5p antagomir组,每组10只.采用内侧半月板切除术以诱导OA模型,给予相应的干预后,取大鼠膝关节组织,RT-qPCR检测miR-21-5p和TNFAIP3 mRNA水平,并采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记和番红O/固绿(safranin O/fast green)染色对膝关节组织进行病理学分析.结果 敲低miR-21-5p可显著升高TNFAIP3的表达,减少NF-κB的活化和核易位,改善IL-1β对软骨细胞的影响(P＜0.05);沉默TNFAIP3可显著逆转敲低miR-21-5p对IL-1β诱导的软骨细胞的影响(P＜0.05).在体内使用miR-21-5p antagomir敲低miR-21-5p表达可显著上调OA大鼠软骨组织中TNFAIP3表达,减少软骨细胞凋亡,并抑制由软骨细胞凋亡引起的软骨组织损失.结论 敲低miR-21-5p可通过靶向上调TNFAIP3表达,抑制关节软骨细胞凋亡,减轻OA期间的软骨损伤.

关键词：骨关节炎、炎症、软骨细胞、细胞凋亡、NF-κB

所属期刊栏目：12

分类号：R684.3(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

在线出版日期：2023-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：45-52